• Eerste de Uitrustingsr1011/r1012 Omgekeerde Transcriptase PCR van de Bundelcdna Synthese Reagentia
Eerste de Uitrustingsr1011/r1012 Omgekeerde Transcriptase PCR van de Bundelcdna Synthese Reagentia

Eerste de Uitrustingsr1011/r1012 Omgekeerde Transcriptase PCR van de Bundelcdna Synthese Reagentia

Productdetails:

Plaats van herkomst: China
Merknaam: GDSBio
Certificering: /
Modelnummer: R1011/R1012

Betalen & Verzenden Algemene voorwaarden:

Min. bestelaantal: 1box
Verpakking Details: het kleine pakket of de massa verdeelt of OEM
Levertijd: 8work dagen
Betalingscondities: L/C, D/A, D/P, T/T, Western Union, MoneyGram
Levering vermogen: 100 doos/dozen per Dag
Beste prijs Contact

Gedetailleerde informatie

Kat. Nr.: R1011/R1012 Concentratie: R1011 (20 rxns), R1012 (100 rxns)
Verschijning: kleurloos Groep: Omgekeerde Transcriptase-PCR Reagentia
Activiteit: Pas Versterkingsvermogen: /
Logo Printing: Met Logo Printing Vervoerpakket: Verpakking
Productiecapaciteit: 100 doos/dozen per Dag Opslagvoorwaarden: Opslag bij -20°C
Hoog licht:

20 rxns keren Transcriptase-PCR Reagentia om

,

100 rxns keren Transcriptase-PCR Reagentia om

,

uitrusting van de cdnasynthese van de 20 rxns de eerste bundel

Productomschrijving

Rechts - PCR Uitrusting

Voor onderzoek slechts gebruik

Cat No. R1011, 20 rxns

Cat No. R1012, 100 rxns

 

Componenten van de uitrusting

Component R1011 (20 rxns) R1012 (100 rxns)
M-MLV (200U/μl) 20 μl 100 μl
RNasin (40U/μl) 12 μl 60 μl
Oligo (dT) 15 (50μM) 20 μl 100 μl
Willekeurige hexamerinleiding (50μM) 20 μl 100 μl
5× eerste-Bundelbuffer 80 μl 400 μl
RN-ase-vrije ddH2 O 1 ml 1 ml × 5
dNTPs (10mM elk) 50 μl 250 μl

 

Opslag

Alle componenten van de uitrusting zouden bij -20°C. moeten worden opgeslagen houden controlerna bij -70°C voor langere opslag.

 

Beschrijving

Rechts-PCR de Uitrusting wordt geoptimaliseerd om eerste-bundel cDNA van gezuiverde poly (A) samen te stellen + of RNA te bedragen. De Uitrusting rechts-PCR voor rechts-PCR levert verhoogde cDNA opbrengsten, hoge gevoeligheid, en de afschriften van gemiddelde lengte in een geschikt formaat. U krijgt alle componenten u voor succesvolle eerste-bundel cDNA synthese die wenst, die uw tijd besparen en uw succes met elk experiment verzekeren. De uitrusting Omgekeerde Transcriptase is een versie van m-MLV rechts die is gebouwd om RN-aseh activiteit te verminderen en voor verhoogde thermische stabiliteit te zorgen. Het enzym wordt gebruikt om cDNA bij een temperatuurwaaier samen te stellen die van 42-55°C, verhoogde specificiteit, hogere opbrengsten verstrekken van cDNA, en meer product van gemiddelde lengte dan andere omgekeerde transcriptases.

 

Toepassingen

Eerste bundel cDNA synthese voor rechts-PCR

Bouw van cDNAbibliotheken

Éénfasige rechts-PCR

Inleidingsuitbreiding

 

Belangrijke nota's

Het vermijden van ribonucleaseverontreiniging

De de RNAzuiverheid en integriteit zijn essentieel voor synthese van cDNA van gemiddelde lengte. RNA kan door RN-ase A worden gedegradeerd, die een hoogst stabiele die verontreinigende stof in om het even welk laboratoriummilieu is wordt gevonden. Alle componenten van de uitrusting zijn streng getest om ervoor te zorgen dat zij RN-ase-Vrij zijn. Om verontreiniging te verhinderen zowel moeten het de laboratoriummilieu als reagentia, alle voorbereide oplossingen van RNases vrij zijn. Algemene aanbevelingen om RN-aseverontreiniging te vermijden:

  • De depc-traktatie al buizen en de pipet tipt om in cDNAsynthese of gebruik verklaarde nuclease-vrij worden gebruikt labware.
  • De slijtage gloves wanneer behandelend RNA en alle reagentia, als huid een gemeenschappelijke bron van RNases zijn. Veranderingshandschoenen vaak.
  • Gebruiks RN-ase-Vrije reagentia, met inbegrip van hoogte - kwaliteitswater (b.v., DEPC-Behandeld Water).
  • Gebruik een RN-aseinhibitor, zoals Dongsheng RNasin (#R2011) om RNA tegen de activiteit van RNases te beschermen.
  • Houd alle uitrustingscomponenten verzegeld strak wanneer niet in gebruik. Houd alle die buizen strak tijdens de omgekeerde transcriptiereactie worden gesloten.

 

Malplaatjerna

Totaal cellulair die RNA door standaardmethodes wordt geïsoleerd is geschikt voor gebruik met de uitrusting. Gezuiverd RNA moet van zouten, metaalionen, ethylalcohol en fenol vrij zijn vermijden remmend de reactie van de cDNAsynthese. De spoorverontreinigende stoffen kunnen door ethylalcoholprecipitatie van RNA worden verwijderd door twee wassen van de korrel met koude 75%-ethylalcohol wordt gevolgd die. Voor toepassingen rechts-PCR, moet malplaatjerna van DNA-verontreiniging vrij zijn. Voorafgaand aan cDNAsynthese, kan RNA met DNase I worden behandeld om spoorhoeveelheden DNA te verwijderen. DNase moet ik door de gebruiker worden verkregen. Voer altijd een controle (rechts-RT-minus) reactie uit die alle componenten voor rechts-PCR behalve het omgekeerde transcriptaseenzym omvat.

 

RN-aseh Spijsvertering

De gevoeligheid van de PCR stap kan worden verhoogd (vooral voor lange malplaatjes) door het RNAmalplaatje uit cDNA te verwijderen: RNA hybride molecule door spijsvertering met RN-ase H na eerste-bundelsynthese. De aanwezigheid van RN-ase H tijdens eerste-bundelsynthese zal het malplaatje mRNA degraderen, resulterend in verminderde cDNAsynthese van gemiddelde lengte en verminderde opbrengsten van eerste-bundel cDNA.

 

Inleidingen

De synthese van eerste bundel cDNA kan met of oligo (dT) inleiding 15, willekeurige inleidingen of gen-specifieke inleidingen worden klaargemaakt.

Oligo (dT) 15 maken cDNA synthese van de polystaart (van A) huidig bij 3 klaar ' - eind van eukaryotic mRNA. De willekeurige Inleidingen stellen cDNA synthese van de totale RNAbevolking (in werking rRNA en mRNA). Daarom resulteert het gebruiken van willekeurige inleidingen voor eerste bundelsynthese in een grotere ingewikkeldheid van geproduceerd cDNA vergelijkbaar geweest met oligo (dT) inleiding 15. Bijgevolg, kunnen de gevoeligheid en de specificiteit van verdere PCR reacties worden verminderd. Nochtans, zijn er verscheidene toepassingen waar het voordelig is om willekeurige inleidingen te gebruiken, zoals cDNAsynthese die mRNAs zonder een polystaart (van A gebruiken), of cDNA synthese poly gebruiken (A) - verrijkte RNAsteekproeven.

De gen-specifieke inleidingen worden gebruikt om specifieke cDNA van een pool van totale RNA of mRNA samen te stellen en moeten door de gebruiker worden verkregen.

 

Eerst - de procedure van de bundel cDNA synthese

De eerste - de bundel cDNA reactie kan als individuele reactie of als reeks parallelle reacties met verschillende RNAmalplaatjes worden uitgevoerd. Daarom kan het reactiemengsel worden voorbereid door reagentia individueel te combineren of een hoofdmengeling die alle componenten behalve malplaatjerna kan bevatten worden voorbereid. Afhankelijk van de structuur van het RNAmalplaatje, kunnen de afzonderlijke stappen voor RNAdenaturatie en inleiding het ontharden resultaten verbeteren rechts-PCR.

Protocol

I. Eerste bundel cDNA synthese

1. Voeg de volgende reagentia in een steriele, nuclease-vrije buis op ijs in de vermelde orde toe:

Malplaatjerna

polymrna (van A)

of specifiek RNA

1-5 μg
Inleiding

oligo (dT) inleiding 15

of Willekeurige hexamerinleiding

1 μl

1 μl

DEPC-behandeld water aan 12,4 μl
Totaal volume 12.4 μl

2. De mengeling zacht, centrifugeert kort en broedt bij 70°C uit voor 5 min. Kou op ijs, rotatie neer en plaatst terug het flesje op ijs.

3. Bereid de volgende Mengeling van de cDNAsynthese voor, voeg de volgende componenten in de vermelde orde toe:

5× eerste-bundelbuffer 4 μl
dNTPs (10 mm elk) 1 μl
RNasin 0,6 μl
M-MLV 1 μl

4. De mengeling zacht en centrifugeert kort.

5. Voor oligo (dT) 15, broed voor 60 min uit bij 42°C. Voor willekeurige hexamer klaargemaakte synthese, broed voor 60 min uit bij 37°C.

6. Eindig de reactie door bij 70°C voor 5 min. te verwarmen.

Het omgekeerde product van de transcriptiereactie kan onmiddellijk in de tweede reacties van de bundel cDNA synthese worden gebruikt of bij -20°C voor een minder dan week worden opgeslagen. Voor langere opslag, wordt -70°C geadviseerd.

 

II. PCR Versterking van Eerste Bundel cDNA

Het product van de eerste bundel cDNA synthese kan direct in PCR worden gebruikt of qPCR. Het volume van eerste de reactiemengsel van de bundel cDNA synthese uit geen meer dan 1/10 van het totale PCR reactievolume moeten zou bestaan. Normaal, worden 2 μl van het eerste de reactiemengsel van de bundel cDNA synthese gebruikt als malplaatje voor verdere PCR in totaal volume 50 μl.

 

Omgekeerde Transcriptase rechts-PCR van m-Mlv

Omgekeerde Transcriptase rechts-PCR van m-Mlv
Dongsheng Biotech biedt verschillende reeks producten aan om u te helpen PCR succes bereiken. Voor enzymen, verstrekken onze Taq-Polymerase, HS Taq Polymerase van DNA, de Polymerase van DNA van FS Taq, Pfu-de Polymerase van DNA en de Polymerase van DNA van Fusiepfu hifi, efficiënt, gevoeligheidspcr prestaties. Wij hebben ook de Lange Taq-Polymerase van DNA voor lange PCR prestaties.

Omgekeerde Transcriptase rechts-PCR van m-Mlv

Wilt u meer details over dit product weten
Ik ben geïnteresseerd Eerste de Uitrustingsr1011/r1012 Omgekeerde Transcriptase PCR van de Bundelcdna Synthese Reagentia kun je me meer details sturen zoals type, maat, hoeveelheid, materiaal, etc.
Bedankt!
Wachten op je antwoord.