10000U gouden Omgekeerde Transcriptase-PCR R3002 Kleurloze Verschijning

Gouden Omgekeerde Transcriptase R3002 (10,000U)

Gouden Omgekeerde Transcriptase

Voor onderzoek slechts gebruik

Componenten

Opslag

Deze reagens zou bij -30~15°C. moeten worden gehouden.

Beschrijving

Gouden Omgekeerde Transcriptase is een nieuwe omgekeerde die transcriptase door moleculaire die evolutie in vitro wordt verkregen op m-MLV (RN-ase H) wordt gebaseerd Omgekeerde Transcriptase. De eerste bundel van cDNA kan bij 37~55°C. worden samengesteld Gouden Omgekeerde Transcriptase verder beduidend gevoeligheid, specificiteit, thermische stabiliteit en halveringstijd heeft verbeterd, die voor omgekeerde transcriptie van RNAmalplaatjes met complexe secundaire structuur zeer geschikt is. Gouden Omgekeerde Transcriptase heeft sterkere polymerisatie en uitbreidingscapaciteit, die voor de synthese van lang cDNA en de bouw van hoog aandeel van de cDNAbibliotheek kan worden gebruikt van gemiddelde lengte.

Eenheidsdefinitie

Poly (Ra)·Oligo (dT) werd gebruikt als malplaatje/inleiding. Bij 37°C voor 10 die min, werd de hoeveelheid enzym wordt vereist om 1 nmol dTTP als acid-insoluble substantie toe te voegen gedefinieerd als 1 eenheid van activiteit (u).

Kwaliteitscontrole

De opsporing van het Exonucleaseresidu: U 200 van dit product en 50 pmol single-stranded substraat van DNA werd uitgebroed bij 37°C voor 16 h, en de DNA-elektroforeseband veranderde niet na de elektroforese van de denaturatiepagina.

Opsporing van endonuclease residu: U 200 van dit product en 0,3 μg van pBR322-DNA werden uitgebroed bij 37°C voor 4 h, en de elektroforesebanden van de plasmiden werden niet veranderd door agarose gelelektroforese.

De opsporing van het RN-aseresidu: het product van 200 U en 1 μg van 293 celrna werden uitgebroed bij 37°C voor 30 min, en de elektroforeseband van RNA was onveranderd door agarose gelelektroforese.

E.coli DNA-residuopsporing: het nucleic zuurresidu in U 60 werd ontdekt door E.coli gDNA-specifieke TaqMan qPCR, en het residu van E.coli-genoom was minder dan 10 exemplaren.

Functionele opsporing 1: 200 u-het enzym werd toegevoegd aan het omgekeerde transcriptiesysteem, werd 1 de cellen totaal RNA van μg HeLa gebruikt als malplaatje, Oligo (dT) ₂₃ als inleiding, en de reactie werd geleid bij 50°C voor het product van 45 min.1/10 cDNA werd genomen voor PCR versterking van VIN-gen. Agarose de gelelektroforese met EB het bevlekken toonde één enkele 4,6 kb band.

Functionele opsporing 2: 200 u-het enzym werd toegevoegd aan het omgekeerde transcriptiesysteem, werd 1 pg HeLa cel totaal RNA gebruikt als malplaatje, Oligo (dT) ₂₃ als inleiding, en de reactie werd geleid bij 50°C voor het product van 30 min.1/10 cDNA werd genomen voor PCR versterking van GAPDH-gen. Agarose de gelelektroforese met EB het bevlekken toonde één enkele 550 bp band.

Functionele opsporing 3: werd 500 ng HeLa cellen totaal RNA als malplaatje, Oligo (dT) ₂₃ VN als inleiding, 50°C-reactie voor het product van 45 min.1/10 cDNA genomen voor PCR versterking van het gen Polε. Agarose gelelektroforese, EB die, één enkele 7,1 kb (gc-rijken) de bevlekken band kan worden gezien.

Kwesties die Aandacht vergen

Verhinder RN-aseverontreiniging

Gelieve te houden het experimentele gebied schoon. De schone handschoenen en de maskers zouden tijdens verrichting moeten worden gedragen. RN-ase-vrij zal voor de centrifugaalbuizen worden verzekerd, pipetting uiteinden en andere die verbruiksgoederen in het experiment worden gebruikt.

Inleidingenselectie

Het opvolgendeexperiment is PCR

Als het malplaatje van eukaryotic oorsprong is, Oligo heeft dT over het algemeen de voorkeur, in paren gerangschikt met de 3 ‚Polya staart van eukaryotic mRNA voor maximumopbrengst van cDNA van gemiddelde lengte.

Hebben de gen-specifieke inleidingen (GSP) de hoogste specificiteit. Nochtans, in sommige gevallen, GSP gebruikt=wordt= voor PCR reactie kan niet de synthese van de eerste bundel van cDNA. effectief leiden die Op dit punt, kan de omgekeerde transcriptie worden overgedaan gebruikend Oligo dT of Willekeurige hexamers.

Willekeurige hexamers hebben de laagste specificiteit, en al RNA, met inbegrip van mRNA, rRNA, en tRNA, als malplaatjes voor Willekeurige hexamers zou kunnen worden gebruikt. Willekeurige hexamers kunnen als inleiding worden gebruikt wanneer het doelgebied een complexe secundaire structuur of een hoge GC inhoud heeft, of wanneer het malplaatje prokaryotic is en het gebruik van Oligo dT of gen-specifieke inleidingen (GSP) cDNA geen synthese kan effectief leiden.

Het opvolgendeexperiment is qPCR

Oligo die dT met Willekeurige hexamers wordt gemengd resulteerde in dezelfde efficiency van de cDNAsynthese in elk gebied van mRNA, die de authenticiteit en de herhaalbaarheid van de kwantitatieve resultaten helpen te verbeteren.

Dongsheng Biotech biedt verschillende reeks producten aan om u te helpen PCR succes bereiken. Voor enzymen, verstrekken onze Taq-Polymerase, HS Taq Polymerase van DNA, de Polymerase van DNA van FS Taq, Pfu-de Polymerase van DNA en de Polymerase van DNA van Fusiepfu hifi, efficiënt, gevoeligheidspcr prestaties. Wij hebben ook de Lange Taq-Polymerase van DNA voor lange PCR prestaties.