Bibliotheek van de Bouw de Snelle DNA van de GDSBiongs Bibliotheek plus Prep Uitrusting voor MGI

Productomschrijving

Snelle DNA-Bibliotheek plus Prep Uitrusting voor MGI

[Productnaam]

Snelle DNA-Bibliotheek plus Prep Uitrusting voor MGI

[Kat. Nr. /Spec.]

KM004-A/24 rxns; KM004-B/96 rxns; steekproefzak 6 rxns

[Productomschrijving]

Beogend MGI-hoog-productie die platform rangschikken, verstrekt deze uitrusting een geschikte en universele DNA-regeling van de bibliotheekbouw in één buis. Het combineert fragmentatie, eindreparatie en a-De steel verwijdert van in één die stap, zeer verkortend de tijd van bibliotheekbouw en verminderend de fout door vervelende stappen wordt veroorzaakt. Na fragmentatie en eindvoorbereiding, kan het product direct met adapter zonder extra reiniging worden afgebonden, en de verdere procedure is hetzelfde als dat van de Bibliotheek Prep Uitrusting van DNA van #KM001 Snelle voor MGI. De volledige bibliotheekgetalsmatige weergave kan door methode van de dsDNA de fluorescente kleurstof (b.v., Thermoqubit Flex Fluorometer) of absolute getalsmatige weergavepcr worden uitgevoerd na het verdunnen van de bibliotheek aan een aangewezen concentratie.

[Steekproeftype]

Lijst 1 Geadviseerde Input voor Gemeenschappelijke DNA

[Opslagvoorwaarde & Houdbaarheid]

Alle reagentia zouden bij -20°C.-Afbindingsbuffer moeten worden opgeslagen is normaal voor kristallen om bij lage temperaturen te storten, zou het aan kamertemperatuur v3o3or gebruik moeten worden in evenwicht gebracht. Het product is geldig 12 maanden.

[Componenten]

*FEP de buffer is de fragmentatie en van de eindvoorbereiding reactiebuffer. FEP-de Enzymmengeling is een mengsel van enzym met betrekking tot fragmentatie en eindvoorbereiding.

* Als er meer dan één steekproef is, wordt de mengeling van de de adapterinleiding van #KM002 en #KM003-geadviseerd. Deze uitrusting verstrekt een reeks inleidingen, is de inleidingsopeenvolging als volgt:

5 ' - tgtgagccaaggagttg-3'

5 ' - gaacgacatggctacga-3'

Nota: geadviseerde selectieparels: De Selectie Magbeads van DNA van #NC1011 GDSPure of de parels van AMPure XP.

[Nota's]

1. Wij bieden twee types van Universele geplaatste aan Adapterinleidingen (GDS-afzonderlijk gekochte Adapter, #KM002 en #KM003,), maar de klanten kunnen ook van andere fabrikanten kiezen of hun eigen Adapter voor MGI samenstellen rangschikkend platform. Teveel Adapter zal leiden tot de vorming van Adapterdimeer, en de ontoereikende Adapter zal leiden tot lage bibliotheekoutput. Daarom bepaalt de aangewezen Adapterconcentratie de concentratie en de kwaliteit van bibliotheek. De geadviseerde adapterconcentraties voor verschillende hoeveelheden DNA-input worden getoond in de volgende lijst:

Lijst 2 Geadviseerde Gebruiksconcentraties van Adapter

* Uitgedrukt als volumeverhouding van adapter aan verdunner

2. Het enzym in 2× HIFIbibliotheekpcr Hoofdmengeling wordt gebruikt is een B-polymerase van familiedna, die 5 ‚- 3‘ polymerase en 3 ‚- 5‘ exonucleaseactiviteiten heeft, maar 5 ‚- 3‘ exonucleaseactiviteiten die niet heeft. Het heeft hifi en homogeniteit, en sterke duurzame synthesecapaciteit. De strikte controle van het aantal versterkingscycli is bijzonder belangrijk voor bibliotheekoutput. De volgende lijst toont het geadviseerd aantal versterkingscycli die aan verschillende ingevoerde hoeveelheden DNA beantwoorden:

Lijst 3 Geadviseerd Aantal Versterkingscycli die aan Verschillende Steekproefinput beantwoorden

Nota: 1. De bovengenoemde lijst geeft de testresultaten weer gebruikend 150bp standaarddna, die voor slechts verwijzing is.

2. Als de onvolledige schakelaars worden gebruikt, zou een minimumaantal cycli (1-3) moeten worden vergroot om een volledige bibliotheek te verkrijgen.

3. Als de kwaliteit van inputdna slecht is, of de grootteselectie tijdens de bibliotheekbouw wordt uitgevoerd, zou het aantal versterkingscycli geschikt moeten worden verhoogd.

[Het Standaardproces van de Bibliotheekbouw]

Fragmentatie en Beëindigenreparatie

1. Bepaal de oplosbare samenstelling van malplaatjedna, als geen EDTA, rechtstreeks aan Stap 2 te werk gaat; Als het EDTA bevat is, zouden de magnetische parels 2.2× voor reiniging moeten worden gebruikt, of een overeenkomstig volume van Neutralisatiebuffer volgens de inhoud van EDTA in de volgende lijst voor Neutralisatie moeten zou worden toegevoegd:

2. Bereid de volgende reactie in een PCR 200 μl buis voor:

3. Voeg 10 μl FEP Enzymmengeling aan het bovengenoemde systeem toe, blaas gelijk, centrifugeer kort, en zet onmiddellijk in PCR instrument voor de volgende reactie:

Lijst 4 Holdingstijd wordt vereist om Bibliotheken van Verschillende Grootte te verkrijgen die

Adapterafbinding

1. Ga zo spoedig mogelijk te werk met de afbindingsreactie na fragmentatie en eindvoorbereiding.

2. Verdun de adapter volgens Lijst 2.

3. Bereid het volgende reactiesysteem voor:

4. De draaikolk zacht en rotatie neer kort zich goed de te mengen, centrifugeren en verzamelen kort al vloeistof aan de bodem van de buis.

5. Voer de volgende reactie in een thermische cycler uit:

Geadviseerde Oplossing voor PCR Schoonmaakbeurt/Grootteselectie (het specifieke magnetische parelvolume zou volgens de daadwerkelijke steekproefgrootte moeten worden aangepast)

1. Bereid 100 μl afbindingsproducten in een aangewezen centrifugebuis voor.

2. Voeg 100 μl van opnieuw uitgestelde DNA-selectie magnetische parels aan de steekproef toe. Blaas zacht met een pipet voor 10 keer (of draaikolk voor jaren '30). Broed steekproeven voor 5 min uit bij kamertemperatuur.

3. Plaats de buis op een aangewezen magnetisch rek om de parels van de bovendrijvende substantie te scheiden. Wanneer de oplossing duidelijk is, verwijder en verwerp zorgvuldig de bovendrijvende substantie met een pipet (verwerp geen parels).

4. Voeg 200 μl van vers voorbereidingen getroffen van 80% ethylalcohol aan de buis toe terwijl in het magnetische rek. Broed bij kamertemperatuur uit voor jaren '30, en zorgvuldig verwijder en verwerp dan de bovendrijvende substantie (stoor geen parels).

5. Herhaal eens Stap 4 voor een totaal van twee wassen.

Nota: Ben zeker om al zichtbare vloeistof na de tweede was te verwijderen.

6. Droog de parels aan de lucht tot de oppervlakte van de magnetische parels geen duidelijke glans heeft terwijl de buis op het magnetische rek met het open deksel is.

Nota: niet overdry de parels, kan dit in lagere terugwinning van DNA resulteren. Wanneer de parels beginnen te barsten, zijn zij te droog.

7. Verwijder de buis uit het magnetische rek. Voeg elution 22 μl buffer (10mM tris-HCl, pH8.0-8.5) aan de buis toe. Mengeling goed door boven en beneden minstens 10 keer of op een draaikolkmixer voor jaren '30 pipetting. Broed voor 3-5 min uit bij kamertemperatuur.

8. Plaats de buis op het magnetische rek. Na 5 min (of wanneer de oplossing) duidelijk is, breng bovendrijvende substantie 20 μl naar een nieuwe buis over. De selectie wordt voltooid, en geselecteerde DNA kan voor verdere experimenten worden gebruikt of bij -20°C lange tijd worden opgeslagen.

Bibliotheekversterking

1. Bereid de volgende reactie in een PCR buis voor:

2. De draaikolk zacht en rotatie neer kort zich goed de te mengen, centrifugeren en verzamelen kort al vloeistof aan de bodem van de buis.

3. Voer de volgende reactie in een thermische cycler uit:

Geadviseerde Oplossing voor PCR Schoonmaakbeurt/Grootteselectie (het specifieke magnetische parelvolume zou volgens de daadwerkelijke steekproefgrootte moeten worden aangepast)

1. Bereid 50 μl afbindingsproducten in een aangewezen centrifugebuis voor.

2. Voeg 45 μl van opnieuw uitgestelde DNA-selectie magnetische parels aan de steekproef toe. Blaas zacht met een pipet voor 10 keer (of draaikolk voor jaren '30). Broed steekproeven voor 5 min uit bij kamertemperatuur.

3. Plaats de buis op een aangewezen magnetisch rek om de parels van de bovendrijvende substantie te scheiden. Wanneer de oplossing duidelijk is, verwijder en verwerp zorgvuldig de bovendrijvende substantie met een pipet (verwerp geen parels).

4. Voeg 200 μl van vers voorbereidingen getroffen van 80% ethylalcohol aan de buis toe terwijl in het magnetische rek. Broed bij kamertemperatuur uit voor jaren '30, en zorgvuldig verwijder en verwerp dan de bovendrijvende substantie (stoor geen parels).

5. Herhaal eens Stap 4 voor een totaal van twee wassen.

Nota: Ben zeker om al zichtbare vloeistof na de tweede was te verwijderen.

6. Droog de parels aan de lucht tot de oppervlakte van de magnetische parels geen duidelijke glans heeft terwijl de buis op het magnetische rek met het open deksel is.

Nota: niet overdry de parels, kan dit in lagere terugwinning van DNA resulteren. Wanneer de parels beginnen te barsten, zijn zij te droog.

7. Verwijder de buis uit het magnetische rek. Voeg elution 22 μl buffer (10mM tris-HCl, pH8.0-8.5) aan de buis toe. Mengeling goed door boven en beneden minstens 10 keer of op een draaikolkmixer voor jaren '30 pipetting. Broed voor 3-5 min uit bij kamertemperatuur.

8. Plaats de buis op het magnetische rek. Na 5 min (of wanneer de oplossing) duidelijk is, breng bovendrijvende substantie 20 μl naar een nieuwe buis over. De selectie wordt voltooid, en geselecteerde DNA kan bij 2-8°C 1-2 weken worden opgeslagen of bij -20°C lange tijd worden opgeslagen.

[Bijlage] Geadviseerde Regeling voor Tweezijdige Selectie

Als dubbel-rond de selectie wordt vereist, verstrekken wij de volgende regeling om het aangewezen magnetische parelvolume volgens de verwachte bibliotheekgrootte te selecteren. De grootteselectie kan vóór eindreparatie of na versterking worden uitgevoerd. Twee of meer dubbel-om selectie zullen zeer de bibliotheekopbrengst verminderen.

Vul het bibliotheekvolume in de lijst hieronder aan 100 μl. Selecteer het volume van magnetische parels in twee rondes volgens de verwachte bibliotheekgrootte. En voer de selectieverrichting volgens de volgende instructies uit.

Lijst 5 Geadviseerde Hoeveelheid Magnetische Parels voor dubbel-Ronde Selectie

1. Vul het bibliotheekvolume aan 100 μl in een 200μl-PCR buis en geëtiketteerd als A. Add een bepaald volume van Magnetische parels volgens Lijst 5 (om 1) aan de slag van buisa. Gently met een pipet voor jaren '30. Broed steekproeven voor 5 min uit bij kamertemperatuur.

2. Plaats de buis A op een aangewezen magnetisch rek om de parels van de bovendrijvende substantie te scheiden. Wanneer de oplossing duidelijk is, verwijder zorgvuldig de bovendrijvende substantie aan een nieuwe buis en etiketteer het als parels van B. Discard.

3. Toevoeg een bepaald volume van Magnetische parels volgens Lijst 5 (om 2) aan de buis B. Blaas zacht met een pipet voor jaren '30. Broed steekproeven voor 5 min uit bij kamertemperatuur. Plaats de buis B op magnetisch rek. Wanneer de oplossing duidelijk is, verwijder en verwerp zorgvuldig de bovendrijvende substantie.

4. Voeg 200 μl van vers voorbereidingen getroffen van 80% ethylalcohol aan de buis B toe terwijl in het magnetische rek. Broed bij kamertemperatuur uit voor jaren '30, en zorgvuldig verwijder en verwerp dan de bovendrijvende substantie (stoor geen parels).

5. Herhaal eens Stap 6 voor een totaal van twee wassen.

Nota: Ben zeker om al zichtbare vloeistof na de tweede was te verwijderen.

6. Droog de parels aan de lucht tot de oppervlakte van de magnetische parels geen duidelijke glans heeft terwijl de buis B op het magnetische rek met het open deksel is.

Nota: niet overdry de parels, kan dit in lagere terugwinning van DNA resulteren. Wanneer de parels beginnen te barsten, zijn zij te droog.

7. Verwijder de buis B uit het magnetische rek. Voeg elution 22 μl buffer aan de buis toe. Mengeling goed door boven en beneden minstens 10 keer of op een draaikolkmixer voor jaren '30 pipetting. Broed voor 3-5 min uit bij kamertemperatuur.

Nota: Indien gericht vang niet zal gepresteerd worden, toevoegen elution buffer (10mM tris-HCl, ph 8.0-8.5) voor elution. Anders, zou het gesteriliseerde ultrapurewater voor elution moeten worden gebruikt.

• Plaatsbuis B op het magnetische rek. Overdracht 20 bovendrijvende substantie μl aan een nieuwe buis.

Voor Onderzoek slechts Gebruik

GDSBio is een high-tech onderneming die zich op onderzoek en ontwikkeling, productie en verkoop van producten de van uitstekende kwaliteit van de het levenswetenschap concentreren. Het bedrijf heeft een volledige productregel, met PCR technologie die als kern, zich op algemene PCR, fluorescentie kwantitatieve PCR, NGS-opslag, nucleic zuurelektroforese en andere moleculaire biologietechnologieën concentreren, en moleculaire onderzoekreagentia, moleculaire kenmerkende grondstoffen in vitro, nucleic zuurextractie en opsporingsreagentia en andere producten ontwikkeld.